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实验室透析常见问题解答
  • 发布日期:2020-07-15      浏览次数:128
    • Q1:如何准备透析膜管?

      透析膜管的准备因膜管材质和生产工艺的差别而有所不同。注意,我们不推荐煮沸处理,因其可能损坏膜管并改变膜孔径。
      1、即用型 RC 膜,CE 膜可以用 DI 水冲洗 15-30 分钟,去除防腐剂处理液。
      2、Spectra/PorR7 标准级 RC 膜已经预处理,去除了重金属和硫化物,只需在去离子水中浸泡 15-30 分钟,去除叠 dan 化钠即可。
      3、Spectra/PorR 1-6 标准级 RC 膜,一般情况下,在水中漂洗足以去除甘油或防腐剂,而对于亲和研究之类极其敏感的透析应用或者重金属及硫化物会影响透析样品下游分析的应用,可能需要一些额外的处理以去除在生产过程中引入的痕量水平重金属及硫化物。
       
      Q2:透析的原理是什么?一般需要多长时间才能完成?
      1、透析是指溶质在浓度梯度的驱使下,选择性扩散通过半透膜,从而达到大 / 小分子分离,膜两侧浓度平衡,即小颗粒的溶质通过膜,而大分子物质不能通过,被截留在膜另一边。
      2、如果将样品置于透析膜管内,通过置换膜管外部的透析缓冲液,可将小颗粒物质清除,从而达到纯化大分子物质的目的。一般来说,一天之内置换 3-5 次缓冲液,然后在室温条件下,放在搅拌台上隔夜透析,即可达到的透析结果。标准的透析操作一般需要 16-24 小时。许多因素会影响透析效率,包括:扩散系数、pH 值、温度、时间、物质浓度、样品体积、透析缓冲液体积、透析缓冲液的置换次数、膜表面积、膜厚度、分子带电荷及缓冲液搅拌速率。
       
      Q3:透析一个样品需要多少体积的透析缓冲液?缓冲液置换频率怎么安排?
      透析缓冲液的体积越大,小分子扩散的驱动力越大。我们一般推荐缓冲液和样品的体积比为 100:1。当扩散速率降低,膜两侧溶液趋于平衡时,通过置换缓冲液,可维持小分子扩散驱动力和透析速率。我们一般推荐在 12-24 小时内,置换缓冲液 2 到 3 次,具体安排如下:
      1、缓冲液置换:透析开始后 2-3 小时
      2、二缓冲液置换:透析开始后 4-5 小时
      3、最后一次缓冲液置换:透析隔夜之前
       
      Q4:如何选择正确的截留分子量(MWCO)?
      截留分子量应该竟可能的大,以使透析速率更大化。但是,为了获得最大的样品回收率,选择的截留分子量应至少为需纯化的大分子物质分子量的一半。对于需对几种分子进行分离的应用,分子之间的分子量差至少为 5 倍,才能完成有效的膜透析。若不能满足分子量差的要求,可能需要使用其它的分离技术,如色谱方法或切向流过滤。
       
      Q5:哪种膜的蛋白质结合率最低?
      每种膜对不同的分子具有不同的亲和性。对于球状蛋白,相对的结合亲和性由低到高为 CE< RC。

      Q6:怎样为膜管选择合适大小的膜夹?
      1、标准 RC 膜(Spectra/Por 1-7)和生物技术级 RC 膜由柔韧的再生纤维素聚合物制造,可使用任何一种透析膜夹密封。生物技术级 CE & PVDF 膜由相对刚性的聚合物制造,需要使用相对温和的通用膜夹。鉴于通用膜夹对于所有类型的膜管都能起到很好的密封作用,如不确定选择哪种膜夹合适,使用通用膜夹即可。标准膜夹一般只用于标准级RC 膜管。
      2、膜夹的密封宽度一般需比膜管的扁平宽度长 4-10 mm。通用膜夹的最小密封宽度为 50 mm。对于所有扁平宽度规格的膜管,均有相应的膜夹可供选择。

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