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做ELISA实验,这些技巧少不了!
  • 发布日期:2020-08-17      浏览次数:50
    • 介绍:

      ELISA试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等,比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。

      Elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。

       

      特点:

      1.高效、灵敏、特异的抗体。

      2.稳定的重复性和可靠性。

      3.吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体。

      4.适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种标本类型。

      5.节省实验经费。

       

      操作方法

      1.标准品的稀释,请按照说明书进行操作。

      2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

      3. 加样:不规范的移液操作可能带来误差。

      1)空白孔,空白对照孔不加样品,生物素标记的抗NE抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液,其余各步操作相同;

      2)标准品孔:加入标准品50ul,链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);

      3)待测样品孔:加入样本40ul,然后各加入抗NE抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60分钟。

      4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

      5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

      6. 显色:每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。

      7. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

      8. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后10分钟以内进行。

      9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。

       

      洗板方法

      一、手工洗板方法:

      甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。 

      二、自动洗板:

      如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

       

      注意事项

      1.从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

      2.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。

      3.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

      4.为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

      5.不同批次试剂盒不能混用,如遇试剂不够,请及时联系客服解决

      6.底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

      7.中、英文说明书或许会有不一致之处,请以英文说明书为准。  

      8.保存温度:2-8℃。

      9.有效期:6个月(2-8℃)。

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