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用溴甲酚紫法测定白蛋白含量的流程
  • 发布日期:2021-12-10      浏览次数:721
    • 实验原理

      溴甲酚紫法(BCP法)是一种测定白蛋白含量的方法。实验原理为在pH5.2的缓冲液中,有Brij-35存在时,溴甲酚紫(bromocresol puple,BCP)可与白蛋白结合形成绿色复合物,在波长603nm处的吸光度与白蛋白浓度成正比例,与同样处理的白蛋白标准比较,可求得血清中白蛋白含量。

      实验原理

      在pH5.2的缓冲液中,有Brij-35存在时,溴甲酚紫(bromocresol puple,BCP)可与白蛋白结合形成绿色复合物,在波长603nm处的吸光度与白蛋白浓度成正比例,与同样处理的白蛋白标准比较,可求得血清中白蛋白含量。

      试剂与器材

      1.250g/LBrij-35溶液见BCG法

      2.50mmol/L BCP贮存液称取BCP 675mg溶于无水乙醇15ml中,当溶液变为橙色透明时,用无水乙醇稀释至25ml。置4C冰箱保存至少可稳定3个月。

      3.2.5mol/L醋酸溶液量取冰醋酸150ml用蒸馏水稀释至1L。

      4.BCP试剂称取无水醋酸钠6.03g(或三结晶水的醋酸钠10g)溶于蒸馏水950ml中,加Brij-35液1ml,BCP贮存液1ml,用2.5mol/L醋酸溶液调pH至5.20+0.03(约需10ml),加蒸馏水至1L(BCP贮存液也可在调好pH后再加)。在室温可稳定一周。

      5.0.154mol/L NaCl溶液称取NaCl9g用蒸馏水溶解至1L。

      6.白蛋白标准液采用人白蛋白或定值,切不可用动物血清蛋白。

      操作步骤

      1.生化自动分析仪分析法参数见有关仪器操作说明书。

      2.手工操作法。

      混匀,1min后在波长603nm处比色,用空白管调零,读取测定管和标准管吸光度。

      评价

      本法反应最适pH为5.20,接近α-和β-球蛋白的等电点,抑制了这两种球蛋白与BCP的非特异性反应,故对测定白蛋白具有高特异性。此外,BCP与白蛋白的反应为即时*反应,不受时间和温度变化的影响,呈色后稳定1h以上。本法线性范围5-50g/L,在10-40g呈线性良好,50g/l时稍偏低;CV为0.45%;回收率99.3%~102%,平均回收率100.5%.本法兼有BCG法的主要优点,克服了BCG法的多数缺点,与火箭电泳法结果相一致,成为测定血清白蛋白燃料结合法中较好的一个方法。BCP与牛,猪(新鲜或冻干)血清反应性仅为BCG反应的1/3,不适用于动物血清白蛋白作质量控制,机制尚待阐明。