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Trizol法提取总RNA的流程及原理
  • 发布日期:2022-10-26      浏览次数:968
    • 提取原理:
      Trizol试剂的主要成分是苯/酚。苯/酚的主要作用是对细胞进行裂解,从而使细胞当中的蛋白质以及核酸物质解聚而得以释放。苯/酚虽然可以有效的使蛋白质变性,但它不能抑制RNA酶的活性,因此Trizol中还加入了8-羟基喹/啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase(即RNA酶)。

      Trizol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。在样品的裂解液或匀浆中,Trizol能保持RNA的完整性。加入氯/仿(CHCl3)后离心,样品能分成水样层和有机层。而RNA存在于水样层中。在收集上面的水样层后,RNA可以通过异丙醇沉淀的方法来还原。在除去水样层之后,样品中的核酸和蛋白也能相继以沉淀的形式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,在有机层中加入异丙醇能析出有机层的蛋白。

      Trizol试剂不但可用于小量样品(组织:50-100mg;细胞:5×106),也可用于大量样品(组织≥1g或细胞≥107),对动物、植物、细菌、血液提取都适用,可同时处理大量不同样品。反应迅速,提取的总RNA没有DNA和蛋白质污染,可用于Northernblot、RT-PCR、RNase保护分析等。