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脂质体转染法的原理和操作步骤
  • 发布日期:2025-05-09      浏览次数:153
    • 一般来说细胞转染的方法主要包括:电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等。

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      脂质体的转染方法原理

      脂质体作为体内和体外输送载体的工具,已经研究的十分广泛,用合成的阳离子脂类包裹 DNA,同样可以通过融合而进入细胞。

      使用脂质体将 DNA 带入不同类型的真核细胞,与其它方法相比,有较高的效率和较好的重复性。

      中性脂质体是利用脂质膜包裹 DNA,借助脂质膜将 DNA 导入细胞膜内。

      带正电的阳离子脂质体,DNA 并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的 DNA 自动结合到带正电的脂质体上,形成 DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。

      02

      脂质体转染的操作步骤

      操作步骤:

      (1) 细胞培养:取 6 孔培养板 (或用 35 mm 培养皿),向每孔中加入 2 mL 含 1~2×105 个细胞培养液,37℃ CO2 培养至 40%~60% 汇合时 (汇合过分,转染后不利筛选细胞)。

      (2) 转染液制备:在聚苯乙/烯管中制备以下两液 (为转染每一个孔细胞所用的量)A 液:用不含血清培养基稀释 1-10 μg DNA,终量 100μL,B 液:用不含血清培养基稀释 2-50 μgLR,终量 100μL,轻轻混合 A、B 液,室温中置 10-15 分钟,稍后会出现微浊现象,但并不妨碍转染 (如出现沉淀可能因 LR 或 DNA 浓度过高所致,应酌情减量)。

      (3) 转染准备:用 2 mL 不含血清培养液漂洗两次,再加入 1 mL 不含血清培养液。

      (4) 转染:把 A/B 复合物缓缓加入培养液中,摇匀,37℃ 温箱置 6~24 小时,吸除无血清转染液,换入正常培养液继续培养。

      (5) 其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。

      注意:转染时切勿加血清,血清对转染效率有很大影响。