DNA 分离凝胶电泳是分子生物学实验中的核酸分离与分析技术之一。其基本原理是利用琼脂糖凝胶作为支持介质，在电场作用下，带负电的 DNA 分子从负极向正极迁移。由于不同大小、构象和电荷状态的 DNA 分子在凝胶中的迁移速率不同，因此可以实现分离。分离后的 DNA 条带可通过染色剂显色，并在紫外凝胶成像系统下观察和记录。

本文依据截屏中的实验流程，将 DNA 分离凝胶电泳的操作步骤整理如下，供实验教学与操作参考。

一、实验目的

1. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理；
2. 学会配制琼脂糖凝胶；
3. 掌握 DNA 样品上样、电泳分离及结果观察方法；
4. 能够根据 DNA 条带位置判断片段迁移情况，并规范记录实验结果。

二、实验原理

DNA 分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下会向正极方向移动。在琼脂糖凝胶中，DNA 的迁移速率主要受以下因素影响：

- **DNA 分子大小**：较小的 DNA 片段迁移较快，较大的片段迁移较慢；
- **琼脂糖浓度**：浓度越高，凝胶孔径越小，越适合分离较小片段；
- **电场强度**：电压过高可能导致条带变形或分辨率下降；
- **DNA 构象**：线性、环状或超螺旋 DNA 的迁移行为可能不同；
- **缓冲液体系**：缓冲液维持体系 pH 稳定，并参与导电。

本实验使用 1×TBE 作为电泳缓冲液，采用琼脂糖凝胶分离 DNA，并通过核酸染色剂显示条带位置。

三、试剂与器材

1. 主要试剂

- 琼脂糖；
- 1×TBE 电泳缓冲液；
- DNA 样品；
- 核酸染色剂；
- 蒸馏水。

2. 主要器材

- 电泳仪；
- 电泳槽；
- 凝胶成像系统；
- 微波炉或水浴加热设备；
- 制胶槽、梳子；
- 量筒、锥形瓶、移液器、一次性手套等。

四、实验步骤

1. 试剂准备

取 10 mL AMRESCO 琼脂糖（批号：RC61091），加入 90 mL 蒸馏水，充分混匀，配制成 100 mL 的 10×TBE 工作液。

2. 制胶

称取 0.8 g 琼脂糖，加入到已配制的 1×TBE 电泳缓冲液中，加热煮沸使琼脂糖溶解。待溶液冷却至约 60℃ 时，加入核酸染色剂，轻轻混匀后倒入制胶槽，插入梳子。

3. 上样

凝胶凝固后，小心拔出梳子，将凝胶放入电泳槽中，加入 1×TBE 电泳缓冲液，使其覆盖凝胶表面。取适量 DNA 样品与上样缓冲液混合后，加入样品孔中。

4. 电泳

连接电泳仪，设置合适电压与时间，开始电泳。电泳过程中可观察到溴酚蓝指示剂向正极方向移动。当指示剂迁移至凝胶约 2/3 距离时，可停止电泳。

5. 结果观察

电泳结束后，关闭电源，取出凝胶，用凝胶成像系统观察并拍照记录。根据 DNA 标准参照物判断各条带的大致位置，并记录实验结果。