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大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)酶联免疫检测试剂盒使用说明书

点击次数:132 发布时间:2019/6/6
提 供 商: 上海联硕生物科技有限公司 资料大小:
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大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)酶联免疫检测  

     试剂盒使用说明书            AE91352TRa

使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

用    途用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)测定。

工作原理

本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平。向预先包被了大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),温育;温育后,加入生物素标记的抗E抗体。再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的浓度呈正相关。

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品3200pg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

标准品稀释液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

链霉亲和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

生物素标记的抗E抗体

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

 

需要而未提供的试剂和器材

  1. 37℃恒温箱。
  2. 标准规格酶标仪。
  3. 精密移液器及一次性吸头
  4. 蒸馏水,
  5. 一次性试管
  6. 吸水纸

 

注意事项

  1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
  2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
  3. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
  4. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜
  5. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
  6. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

 

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

 

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中

 

标本要求

1不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

操作程序

  1. 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)

1600pg/ml

5号标准品

120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液

800pg/ml

4号标准品

120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液

400pg/ml

3号标准品

120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液

200pg/ml

2号标准品

120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液

100pg/ml

1号标准品

120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液

 

 2.根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

 3.加样:1)空白孔,空白对照孔不加样品,生物素标记的抗α-SMA抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液,其余各步操作相同;2)标准品孔:加入标准品50ul,链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);3)代测样品孔:加入样本40ul,然后各加入抗α-SMA抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60分钟。

 4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

 6.显色:每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

 7.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

 8.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

 9.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。

 

操作程序总结:

 

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。

2.批内与批间应分别小于9%和15%

 

检测范围:

检测范围:20pg/ml1600pg/ml

 

保存条件及有效期:

 

保存:2-8℃。

有效期:6个月(2-8℃)

 
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