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你知道ELISA试剂盒是如何进行计算的吗?
  • 发布日期:2023-02-26      浏览次数:540
    •   ELISA试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中待测物质的含量。
       
        它的实验原理:
        ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的待测物质抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
       
        ELISA试剂盒的计算:
        以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
       
        它的注意事项:
        1、ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
        2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
        3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
        4、请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
        5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
        6、底物请避光保存。
        7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
        8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
        9、本试剂不同批号组分不得混用。
        10、如与英文说明书有异,以英文说明书为准。